Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中会逐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身突变到再次出现1DF癌症针灸副作用的成效赴援在学童时期就有很好的描绘，多个胰脏自身突变阴性的学童里有70%在血清转化后10年中患上癌症，而随访15年的学童这一分之一减小到84%。远比之下，占针灸1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的发作机制还并未赢取充分的科学研究。

更加多的人开始采用有系统系统来定义1DF癌症的成效：个体在再次出现多种胰脏自身突变时转回第1在此之后，再次出现血糖异常时转回第2在此之后，再次出现副作用时转回第3在此之后。一些多发胰脏自身突变阴性的个体，在1期和2期，成效较比较慢，并发展为发作的1DF癌症。我们在此之后描绘了一组成员在首次检测到多种胰脏自身突变比对后数10年无癌症的亦非比较慢成效者，这组成员病患人数少，但特征非常明确。随后，我们挖掘出胰脏自身抗原特异性CD8+T细胞内反可不在成效加速的病患里基本不存在，但在近期发作和长期存在的癌症病患里很容易检测到。这可能表明，与成效病患远比，这些病患胃溃疡反可不的调节减比较慢。

早期科学研究表明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但癌症病患存在一些功能缺陷，其里都有对IL-2的反可不能力也降低。此外，癌症病患里的效可不CD4+T细胞内可能对调节极具抵抗性，表现为效可不T细胞内的诱发减弱，自然产生的Treg和体外产生的游离Treg，以及抗原亲身经历的CD4+T细胞内里IL-2反可不减弱。本科学研究的目的是描绘了CD4+调节性T细胞内(Treg)在这群人亦非加速成效者里的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群依此的纵向科学研究，在21岁以下肺癌的病患亲属里检查1DF癌症的脆弱因素。我们在此之后描绘了长期加速成效者的特征，他们保持多重胰脏自身突变阴性超过10年，但并未再次出现癌症的针灸副作用，比较慢性或非完成性胃溃疡。随后，10名暂时保持无癌症并愿意提供大量血液比对的加速成效者不属于T和B细胞内功能分析。在以外的科学研究里，8名比较慢成效者(SP组成员)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的胰脏自身突变阴性。所有的参与者都西北面1DF癌症成效的1期，尽管一些人随后挽回了胰脏自身突变对某些抗原的阴性反可不，然而，一名病患已经西北面2期数6年，但并未再次出现针灸副作用，一名病患被检验为癌症，该病患72岁，在采集实验比对时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在研究小组成员里对该NADP完成了单独评估。分立外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多模板流式细胞内忍术和T细胞内诱发试验评估NADP里Treg的频赴援、表DF和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类核查、表征和回归)完成无统筹聚类分析，评估Treg表DF。

结果：与生活品质NADP远比，来自比较慢成效体的知觉CD4+T细胞内的统筹聚类标示出，介导的知觉CD4+ Treg频赴援减小，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)传达减小有关。一名HbA1c升温的病患与成效加速者和匹配的远比较组成员远比，Treg谱略有各不相同。功能分析表明，与生活品质NADP远比，来自加速成效体的Treg细胞内的CD4+效可不T细胞内诱发显着受损。表现为对效可不CD4+T细胞内CD25和CD134传达的诱发减小。

三幅1 系统地的表DF分析标示出，CD4+Treg亚DF在比较慢成效链表里减小。由FlowSOM分解的Treg一楼，涌进在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物传达核查出10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)采用9个各不相同Treg标有分解的10个元簇的MST。每个键值都是一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在键值组成员周围剪裁。每个键值里的饼三幅暗示单个标有的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出基本标有传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)相比较金属量为每个metacluster筒中央线三幅(金属量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。紫色左上方都是ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的预测模DF证实，Treg频赴援的减小是成效加速的标志。分级介导(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的都是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达完成分立，仿真FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(白点)组成员以及NADPSP 606(紫色)里CD25+ cd127的频赴援概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的筒中央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD链表间的各不相同。(j)筒中央线三幅标示出了在SP(白点)和HD(灰点)组成员里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比较金属量(分之一)。(k)灰度标示出每个簇的表DF(粉色)和Treg标有相比较传达与取材传达(紫色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。取材与所有其他簇里标有的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

三幅3 与生活品质献血者远比，成效加速者知觉treg的GITR减小。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的传达热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达并联，标示出灰度(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(紫色)所有NADP都有，p< 0.05(紫色)NADPSP 606和匹配的HD不都有在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从分级介导，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)并联，标示出灰度(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

三幅4 来自加速成效的CD4+ treg细胞内控制效可不CD4+T细胞内的能力也降低。SP组成员用紫色的中央线和左上方暗示，HD组成员用黑色的中央线和左上方暗示，紫色的中央线/左上方暗示NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标有为CFSE, Treg按推论的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培养3天后完成流式细胞内忍术检测。(a-d)与CD4+这样的话者相比较可不的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。采用阴性远比较(介导的响可不细胞内内含treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 效可不CD4+T细胞内对加速成效的T细胞内再造的诱发更恰当。SP组成员用紫色的中央线和左上方暗示，HD组成员用黑色的中央线和左上方暗示，紫色的中央线/左上方暗示NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标有，treg按推论的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培养3天后完成流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱发前年(b)。(c,d) CD25诱发前年(c)和CD134诱发前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速成效子的再造知觉CD4+Treg在GITR传达里赢取了扩展和丰富，凸显了进一步科学研究Treg在1DF癌症风险个体里的关联性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28